产品货号：
JN0007
中文名称：
两步法RT-PCR试剂盒
英文名称：
BalbScript Two-Step RT-PCR Kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒是基于M-MuLV反转录酶和热启动Taq DNA聚合酶，具有高效合成能力和高扩增效率。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，用第一链cDNA合成预混液进行反转录，然后用2×HotStart Taq PCR MasterMix进行扩增。本试剂盒含有从RNA到cDNA，以cDNA为模板进行扩增的全部试剂。
- 操作简单：操作步骤少，降低污染。
- 特异性高：使用HotStart Taq酶进行扩增，减少非特异性反应。
| 组分 | 规格 |
| 2×BalbScript 1st cDNA SuperMix | 500μL |
| 2×HotStartTaq Master Mix | 1mL×2 |
| RNase Free Water | 1mL |
保存：-20℃
- 本试剂盒进行PCR扩增时延伸时间为1kb/min，客户可根据具体片段长度进行延伸时间的调整。
- 如果同时操作多个样品，建议先在冰上先配制预混液，然后再分装到各个反应管中，加入模板启动反应。
- 反应扩增时出现目标条带拖带，系模板浓度过高或特异引物浓度不适等原因所致，可对模板及引物浓度等进行调整；反应出现杂带，可对退火温度进行调整，或重新设计特异性高的引物。
- 为了保证反应的正常进行，需使用高质量的RNA模板。
- 第一链cDNA合成
试剂融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。- 按顺序加入以下反应物：
可选步骤：如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后，65℃孵育5分钟（有助于打开高级结构，便于下一步反应的进行），迅速置于冰上冷却，再加入其它组分。成分 用量 模板RNA 总RNA(0.1ng～5μg)
poly(A) mRNA(10pg)
特异性RNA(0.01pg)2×BalbScript 1st cDNA SuperMix 10μL RNase Free Water 至20μL - 轻轻混匀，离心。
- 42℃孵育15～30分钟（如果RNA模板中不含poly A结构，25℃先孵育5分钟，随后42℃孵育15～30分钟）。
- 产物可直接用于下一步反应。如果不立即使用，可于-20℃保存一周，长时间保存建议-70℃放置。
- 按顺序加入以下反应物：
- 第一链cDNA的PCR扩增
合成的第一链cDNA可直接用于PCR。- 常用反应体系（20μL）：
成分 用量 2×HotStart Taq Master Mix 10μL 上游引物 0.2～1.0μM（终浓度） 下游引物 0.2～1.0μM（终浓度） 模板 1～2μL ddH2O 至20μL - 常用PCR循环：
- 当扩增片段＜3K：
温度 时间 循环数 94℃ 5分钟 1 94℃ 20秒 30 50～60℃ 20秒 72℃ 60秒/kb 72℃ 5分钟 1 4℃ 保温 1 - 当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：
温度 时间 循环数 94℃ 5分钟 1 94℃ 5秒 30 68℃ 60秒/kb 72℃ 5分钟 1 4℃ 保温 1
- 当扩增片段＜3K：
- 常用反应体系（20μL）：
相关搜索：两步法RT-PCR试剂盒，两步法，Two-Step，RT-PCR，通用型，反转录，逆转录，RNA模板，总RNA，mRNA，Taq酶，热启动，HotStart，BalbScript Two-Step RT-PCR Kit